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非洲猪瘟病毒荧光PCR试剂盒产品介绍

发布时间:2021-01-28   点击次数:153次

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非洲猪瘟病毒荧光pcr试剂盒

猪瘟病毒的发病机制:这种病毒的抵抗能力较强,对于感染猪瘟病毒的猪只来讲,能够直接引起高热稽留、皮肤和黏膜变色、运动失调、昏睡和痉挛、扁桃体溃烂以及黏膜的损伤等等。一般猪瘟病毒会分为多种,急性猪瘟病毒的病死率几乎能够达到100,尤其在猪群感染的初期,由于猪瘟病毒的抗原逐渐从单个或者团细胞中出现,并且开始发展到全部的机制细胞内。所以,在猪瘟病毒侵入到皮肤的生发层、舌的中间层和涎腺、扁桃体一个身体的各个细胞组织之中后,能够直接在晚期的发病中,推动其皮肤内出现出血变色的情况、同时还伴随着粒细胞的增多、神经系统的紊乱症状。

【兽药名称】

通用名称:非洲猪瘟病毒荧光PCR核酸检测试剂盒

汉语拼音:Feizliouzhuwen Bingdu Yingguang PCR Hesuan Jianceshijihe

英文名称:African swine Fever Virus (ASFV) PCR Nucleic Acid Diagnostic Kit

商品名称:无

【主要成分与含量】试剂盒中含有如下组分:

【主要成分与含量】试剂盒中含有如下组分:

试剂盒组分

含量

阳性对照

250μL/管×1管

 

阴性对照

250μL/管×1管

 

PCR反应液

850μL/管×1管

 

萌混合液

150μL/管×1管

 

说明书

1份/盒

【作用与用途】 本试剂盒可用于血液、脾脏、肝脏、淋巴结、 样品中非洲猪瘟病毒核酸的检测。

扁桃体、肾脏、肌肉、环境样品等

 

【用法与判定】

1 用法

1.1待检样品釆集、保存及运输

1.1.1样品釆集

(1) 活猪样品 无菌采集抗凝血或血清5mL

(2) 病死猪剖检样品或屠宰场剖检样品 无菌采集死猪的牌、肺、肾、扁桃体、淋巴结、肌肉等组织样品。2〜8°C低温运至实验室用于检测。

(3) 病猪污染的周边环境 采集与病猪相关场所的粪便、饲料、污水样品。2〜8°C低温运至实验室用于检测。

1.1.2样品保存 采集的样品在2〜8°C保存应不超过24小时,-70°C条件下保存,避免反复冻 融。

1.1.3样品运输泡沫箱加冰袋后密封进行运输。包装和运输应符合农业农村部《高致病性动 物病原微生物菌(毒)种或者样品运输包装规范》和交通运输部门关于危险品运输管理的有关规定。

1.2样品处理

1.2.1血液样品处理 抗凝血样品置于离心管中,8000 r/min离心2分钟取上层血浆,编号待 检。非抗凝血样品置于离心管中,待凝固后,8000 r/min离心2分钟取200μL上层血清,编号待检。

1.2.2组织样品处理取适量脾脏、肝脏、淋巴结、扁桃体、肌肉等组织,置于研磨器或研磨管中研磨,再加适量生理盐水混匀,制成约10%的组织匀浆,8000 r/min离心2分钟,取200μL上 清于RNase/DNase-free无菌离心管中,编号备用。

1.2.3环境样品处理

1.2.3.1粪便、饲料样品处理方法取适量的粪便、饲料放入盛有PBS缓冲液的研磨管中研磨混匀,制成约10%的匀浆液.8000 r/min离心2分钟,取200μL上清于RNase/DNase-free无菌离心 管中,编号备用。

1.2.3.2污水样品处理方法 直接取200μL污水进行核酸提取。

1.3病毒核酸的提取用磁珠法或柱式法进行DNA核酸提取。

1.4荧光PCR反应:

1.4.1从试剂盒中取出荧光PCR反应液、酶混合液,室温融化后,2000 r/min离心5秒。设被 检样品、阳性对照和阴性对照总和为n,则反应体系配制如下:

试剂 体系

PCR 反应液 17× (n+1) μL

酶混合液 3× (n+1) μL

1.4.2在新的RNase/DNase-fire 1.5 ml离心管中加入上述试剂,充分混匀后瞬时离心。按照20μL/ 管分装量将试剂分装至荧光PCR反应管。

1.4.3在上述制备好的荧光PCR反应管中分别加入阴性对照、阳性对照各5μL、处理好的待测核酸各5μL,终体积25μL/管,盖好荧光PCR反应管盖,混匀后瞬时离心,转移到荧光PCR仪器 上。

144将PCR反应管放置在荧光PCR仪样品槽中,在荧光PCR仪上运行以下程序:

步骤

条件

循环数

UNG处理

50 ℃2分钟

1

预变性

95 ℃3分钟

1

预扩增

95 ℃: 8 秒 55 ℃: 8 秒

 

5

PCR扩増

95 ℃: 8 秒 55 ℃: 8 秒

 

40

 

荧光通道选择FAM,在PCR扩增阶段每个循环的55℃时采集荧光信号。设置扩增体系为25μL, 同时要选择passive reference和quencher为none的模式。(注:若荧光PCR仪(如AB17500)按说明 书中的反应程序设置后因持温时间短无法运行,可将预扩增和PCR扩增条件变更为95C: 5秒 55°C: 30 秒)

2结果判定

2.1试验有效性判定

阳性对照有典型扩增曲线且Ct值≤30.且阴性对照无Cl值或无扩增曲线,线形为直线或轻微斜线,无指数增长期。则判试验结果有效。否则,此次试验视为无效。

2.2样品判定

2.2.1阳性:样本检测结果Ct值≤35且有明显指数增长期,判定检出非洲猪瘟病毒核酸。

2.2.2可疑:样本检测结果Ct值在35〜38范围内。此时应对样本进行重复检测,如果重复实验 结果Ct值仍在35〜38范围内,有明显指数增长期.则判定为阳性,否则为阴性。

2.2.3阴性:样本检测结果Ct值>38或无Ct值,判定未检出非洲猪瘟病毒核酸。

【注意事项】(1)实验前请仔细阅读本试剂盒说明书,严格按照操作步骤执行,在操作过 程中对时间、试剂体积等精确控制可以获得好的结果。

(2) 实验室应严格按照有关规定分区管理,依照配液区-模板提取区-扩增区-分析区顺序 进行基因检测。各区间人员、器材、试剂及空气流向应有严格要求。

(3) 核酸提取有关耗村确保洁净、无DNase/RNase,提取过程尽量低温、快速,完成后进入 下一步实验或冻保。

(4) 对于顶部采光仪器要带新的一次性PE手套对荧光PCR管封盖,对于底部采光仪

器要避免徒手或使用过的手套接触荧光PCR管底,检测过程中使用不带荧光物质一次性乳胶手套。

(5) 冻存试剂使用前应于室温下完全融化,瞬时离心使液体完全沉于管底。避免反复冻融, 以免影响试剂性能。

(6) 样品、阳性对照等在使用后及时封盖,.避免组分间及气溶胶等的污染造成假阳性。

(7) 扩增产物禁止开盖,实验产生的废弃物应及时收集,远离PCR实验室进行无害化处理。

【规格】50头份/盒

【贮藏与有效期】试剂盒置-20°C以下避光保存,有效期12个月。

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